Background: Technical factors relating to processing viscid sputum in cystic fibrosis (CF) and their influence on the reproducibility and validity of cell counts need to be evaluated. In addition, the methods need to be standardized so that they can be applied clinically and in research.
Objective: To examine the efficiency, reliability and validity of processing small volumes of spontaneously expectorated sputum from subjects with CF.
Methods: Sputum was collected from adults with CF (n=35) and compared with sputum from adults with infective bronchitis or bronchiectasis (IB/B) (n=16), or with asthma or chronic obstructive pulmonary disease (AS/COPD) (n=25). Selected sputum (100 mg to 200 mg) was processed with dithiothreitol (0.1%) and filtered. Total cell count (TCC) and viability were obtained in a counting chamber and cytospins were prepared and stained with Wright's for a differential cell count. Sputum and filter remnant were processed for TCC, viability and differential cell count, and the efficiency was determined by comparing the mean loss in cell yield to the filter. Two different portions from the same sputum sample were processed for cell counts to determine reproducibility. Results were compared with those from IB/B and AS/COPD groups.
Results: Efficiency of cell dispersal was excellent and similar to that in AS/COPD and IB/B groups. Reproducibility of cell counts from two portions of a sputum sample was high (>or=0.80). CF sputum demonstrated a raised TCC and neutrophilia similar to IB/B but significantly higher than AS/COPD.
Conclusion: The selection method of evaluating cell counts in viscid CF sputum is efficient, reproducible and valid.
CONTEXTE :: Des facteurs techniques liés au traitement des expectorations épaisses, produites dans la mucoviscidose (MV) exigent une évaluation de leur influence sur la reproductibilité et la validité de la numération cellulaire. De plus, la normalisation des méthodes s’impose pour permettre leur application en pratique clinique et dans la recherche.
BUT :: L’étude avait pour but d’évaluer l’efficacité, la fiabilité et la validité des techniques de traitement de petits volumes d’expectorations produites spontanément chez des personnes atteintes de MV.
MÉTHODE :: Nous avons procédé à une collecte d’expectorations chez des adultes atteints de MV (n=35) et nous les avons comparées aux expectorations obtenues chez des adultes souffrant d’une bronchite infectieuse ou de bronchiectasie (BI/B) (n=16) ou encore d’asthme ou d’une bronchopneumopathie chronique obstructive (A/BPCO) (n=25). Une partie (100 à 200 mg) des expectorations a été traitée au dithiothréitol à 0,1 %, puis filtrée. Il y a eu numération cellulaire (NC) totale et mesure de la viabilité dans un récipient de numération, et des lames de centrifugation ont été préparées et colorées à la solution de Wright pour permettre une numération cellulaire différentielle. Le reste des expectorations et du filtre a été traité en vue d’une NC totale, d’une mesure de la viabilité et d’une NC différentielle, et l’efficacité a été déterminée par la comparaison de la perte moyenne de cellules dans le produit recueilli par rapport au filtre. La reproductibilité a été déterminée à partir du traitement de deux parties différentes d’un même prélèvement d’expectorations en vue d’une numération cellulaire. Les résultats ont été comparés à ceux enregistrés dans les groupes BI/B et A/BPCO.
RÉSULTATS :: L’efficacité de la dispersion cellulaire était excellente et comparable à celle obtenue dans les groupes A/BPCO et BI/B. La reproductibilité de la numération cellulaire à partir de deux parties différentes d’un même prélèvement s’est montrée très bonne (R≥0,80). Les expectorations produites dans la MV ont révélé une augmentation de la NC totale et de la neutrophilie comparable à celle observée dans le groupe BI/B mais passablement plus forte que celle notée dans le groupe A/BPCO.
CONCLUSION :: La méthode de sélection pour procéder à l’évaluation de la numération cellulaire dans des expectorations épaisses, liées à la mucoviscidose est efficace, reproductible et valide.